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兰花的组织培养

网络　 2006-08-13 　 　

组织培养是先进的无性繁殖方法。取用植物器官或组织的一小部分，脱离母体而加以培养，经过诱导和分化，使它再生成独立的新植株。也称为外植体培养。 早在1902年，德国植物学家哈巴兰特（Haberlandt）预言：“植物细胞具有全能性，每个细胞都像胚胎细胞那样，可以经过体外培养成为一个完整的植株。”在这个假说指引下，法国科学家戈第勒（Gautheret）和诺贝库特（Nobecourt）用小块的胡萝卜根，于1938年成功地在试管中用培养基培养出愈伤组织。1939年，美国科学家怀特（White）用烟草茎段形成层进行组织培养和继代培养，也获得成功。他们的工作为植物细胞和组织培养技术的发展奠定了基础。1949年，美国斯库格（Skooog)等又从愈伤组织中分化出幼苗来，培养出了真正的试管植物。从此之后，组织培养的技术，不断创新改进，在实验上和应用上都获得日新月异的进展。 兰花的茎尖组织培养，最早是法国人葛雷尔（Morel）在1960年获得成功的。他利用茎尖培养的目的是想除去兰属植物上的病毒，他得到了无病毒的幼苗。他发现兰属茎尖培养，可逐渐增大而形成类原球茎体，与兰花胚胎正常发育相似、经过分割，重复培养可以大量增殖、按照理论计算，l个外植体在1年之内可产生400万株苗之多。从此，组织培养技术被应用于兰花的繁殖，刀多年来形成了兰花的工厂化、商品化的生产。 目前，兰花的各个部位，各个器官，即根、茎、叶、芽、花序、幼胚等都可以作为外植体进行培养。 组织培养要有必要的设备和比较高的技术措施。首先要有培养室、无菌接种室及各种培养用具、用品等。在培养时要先配制培养基，剥取外植体，然后消毒、接种、转移，最后试管苗移植等，都需要比较复杂和细致的技术。现将组织培养的方法简介如下。 （一）培养基的配制 培养基是用各种不同成分和剂量的元素，加上各种维生素、激素等制成。兰花种类不同，培养基的成分也有所不同。大多数的培养基是用固体或半固体的，也有用液体培养的，在液体中培养则需特殊的通气方法，如常用的离心机或转动机，不停地将培养基转动。 培养基须包括矿物质、糖、维生素及生长激素。在实际中用得最多的是MS培养基，或在此基础上加添少数激素。 MS培养基（ Murashige and Skoog basic medium）的成分如下： 成分 用量（mg） NH4NO3硝酸铵 400 Ca（NO3）2•4H2O硝酸钙 144 KNO3硝酸钾 80 KH2PO4磷酸二氢钾 125 MgSO4 •7H2O硫酸镁 72 KCL氯化钾 65 NaFe—EDTA螫合铁 25 H3BO3硼酸 16 MnSO4 •4H2O硫酸锰 65 ZnSO4• 7H2O硫酸锌 27 KI碘化钾 0.75 IAA吲跺乙酸 2 Kinetin激动素 0.04—0.2 Thiamin维生素B1 0.1 Nicotinicacid烟酸 0.5 Pyridoxine维生素B6 0.5 Glycine甘氯酸 2 Myo—inositol肌醇 100 Casein—hydrolysate水解酪蛋白 1000 Sugar蔗糖 2% 琼脂（洋菜） l％ 蒸馏水 1000ml PH值为5.0-6.0 配制培养基要在实验室内进行，各种用具、玻璃瓶或试管，都要严格消毒杀菌。最后配成的培养液注入玻璃瓶或试管内，再进行消毒，冷却后接入兰花外植体。接种工作应在无菌接种室或超净工作台上完成。 （二）接种方法 1采取茎尖 兰属植物的组织培养以茎尖为最常用的材料。茎尖是分生组织最为活跃的生长点。选择健壮植株，将外层的叶和鞘叶剥去，把整个茎尖切下，浸入 2.5％的漂白粉溶液或7％的次氯酸钠溶液中15—20分钟。然后取出用蒸馏水冲洗5—6次，将消毒液冲洗十净。在显微镜或扩大镜下将茎尖的生长点挑出，并即刻接种到玻璃管培养基上。 2. 培养原球体 生长点一般经过4-6周的培养，产生出小而圆的原球体。将原球体取出，重新分切，l分为4，再入培养基内培养，经l—2个月又可长出原球体。同样，再行分割；重新培养。在几个月之内，就会获得大量的原球体。 3分化培养 把切割的原球体放在液体培养基中，放在旋转培养床上进行旋转培养。当其小块组织稍为长大后，转接在分化的培养基上，让它分化根和芽。 4 . 试管苗移植 当原球体组织分化根和芽，逐渐长大之后，就成为幼小植株。经一段培养，生长到一定程度就应该从玻璃瓶或试管中取出，移植到土壤或基质中了。移出试管后，用自来水将根上的培养基轻轻冲洗干净。栽培基质一般用水苔或蛭石。栽植后移入温室内培养。 在组织培养中要经过两个关：第一个关是分化培养基的生长激素和剂量，能否分化根和芽，完全取决于它。用什么激素和什么剂量，每种兰花都不一样，要经过摸索试验才能掌握。可以设计几种配方，进行对比实验来确定。第二个关是试管苗移出瓶后，往往不适应外界环境而大批死亡。 要创造良好条件，在精心管理之下，才能获得良好结果。（ 佚名）

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