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杜鹃花组织培养技术（上）

网络　 2006-08-15 　 　

杜鹃花为杜鹃花科杜鹃花属常绿或落叶小灌木，具有品种多、开花早、花色丰富、花期长等特点。近几年，由于扦插繁殖技术的发展，我国杜鹃花产量有了提高。但是，名贵品种因母本少、繁殖系数低，仍不能满足社会需要。而组织培养正是实现杜鹃花工厂化育苗的有效措施。下面将其简单介绍如下：　　一、杜鹃花组培的基本技术环节　　杜鹃花组织培养，通常使用的外植体为茎尖、茎节和花蕾等。因花蕾的分化较为困难，周期长；茎尖的取材受到一定限制，故国内多采用茎节为初代培养的外植体。　　杀菌处理时，杀菌能力较强的升汞（氯化汞）易造成外植体材料的褐变死亡，不宜使用。试验表明，采用饱和的次氯酸钙液上清液或5％的次氯酸钠液作为灭菌剂，效果较好，处理时间为15至20分钟。为加强灭菌效果，还可加入1％的克菌丹或0.1％的吐温－20（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，通常采用70％酒精浸泡，不超过30秒。此外，用中性洗涤剂进行材料的预处理，亦可有效降低其灭菌后的污染率。外植材料灭菌流程为：洗衣粉液浸泡20分钟?流水冲洗至清?70％酒精浸泡30秒?灭菌水冲洗1分钟?5％次氯酸钠浸泡15分钟?灭菌水漂洗3次，每次1分钟。如此，可将外植体污染率降低到15％以下。　　杜鹃花组培所用培养基，为Andeson改良MS培养基：将MS培养基中的硝酸铵和硝酸钾用量分别减至1／4，取消了碘化钾成分，铁盐的用量增加一倍。因杜鹃花科植物原产于高山酸性土壤，培养基的pH值宜为5.0至5.4。培养室温度25℃，光照强度3000勒克斯，光照时间12至14小时。　　杜鹃花在诱芽培养中使用的激素较一般植物有异，需要活性较强的细胞激动素类物质，才能达到满意的效果。试验表明，使用ZT的诱芽效应最为显著；添加KT的处理几乎无丛芽或侧芽发生，仅是原茎尖的伸长；而选用6-BA处理，则导致培养材料的褐变加剧，效果反不如对照。此外，在其后的增殖培养中，杜鹃花对细胞激动素种类的要求，仍以添加ZT为好。　　国外在杜鹃花的组培中多使用2ip作为外源细胞激动素，效果较ZT好。但从经济的角度考虑，仍推荐使用ZT。　　二、杜鹃花的初代和继代增殖培养　　杜鹃花初代诱芽培养，NAA浓度不得超过0.1mg／L，ZT用量的增大对诱芽效应有明显促进作用。但提高ZT浓度时，NAA浓度不宜同步增加，ZT／NAA值较大为好。从经济培养的意义出发，初代培养的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）为宜，培养1个月左右时，诱芽率即可达100％，诱芽系数6.5。　　杜鹃花继代增殖培养，对细胞激动素要求比初代培养有所下降。虽然增殖效应仍随ZT用量的增加而上升，但已不如初代培养时那么明显。此外，用于增殖培养的材料性质不同，其增殖效应也不尽相同，品种间亦存在显著的差异性。供试品种中，‘小桃红’以采用丛芽为增殖培养体时的增殖系数较高（7.6）；而‘花春雨’则反之，以取用芽条时的反应为佳（7.5）。　　杜鹃花组织培养，从接种到诱芽产生，所需的时间明显长于月季和菊花等，故其继代增殖培养的周期也较长。试验中分别以30天和45天为培养周期进行了统计，在各激素水平配比处理中，其增殖芽总数，培养45天要比培养30天的高出50％至80％。所以，杜鹃花组培过程中，过于频繁地切割、转换培养，反达不到快繁的目的。　　三、试管苗的生根培养及移栽　　杜鹃花的生根培养虽不十分困难，但对培养基的要求仍与一般植物不同。其一，基本培养中无机盐大量元素的用量不能减半；其二，蔗糖的用量仍为30g／L，生长素NAA的添加量以1.5至2.0mg／L为好，培养45天时的生根率为60％左右。　　供生根培养的试管苗，要求高15厘米以上，具7片以上真叶，发育健壮。生根培养2周后始见发根，6周时达最高生根率。试验中曾发现，在增殖培养过程中用KT或6－BA取代ZT时，虽诱芽、增殖效应较差，但芽条发育较粗壮。因此，在增殖培养达到一定群体数量后，用KT或6?BA进行继代培养处理，可使生根率和移栽成活率明显提高。此外，在生根培养基中添加2g／L的活性炭，可使试管苗个体发育显著增强，1个月后生根率可达到90％以上。　　国外的研究资料表明，某些常规繁殖（扦插）极难生根的植物，经组织培养后获得的试管苗，生根会容易很多。有些可不经生根培养直接移植到生根介质中，生根率可达100％，3至4周后即可移入温室进行盆栽。这种生根介质为泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物，pH以4至4.5为宜。　　(扬州大学农学院)（ 佚名）

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