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月季组织培养技术

现代农业　 2006-03-20 　 　

一、培养意义 月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。多伦县就是一个月季之乡，但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用，多伦县农业技术推广中心于2000年11月引进组织培养全套设备，成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用。 二、培养程序 （一）无菌培养的建立 （1）选条 从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进6个月季优良品种，分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。 （2）培养基的配制 整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg，6个品种均适用，只是萌发迟早有些差别。 （3）清洗外植体 采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌30分钟。 （4）消毒与接种 在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。 （5）培养 培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～1200LX。 （二）继代增殖 （1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克。 （2）5周后，“红双喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金丝鸟”达15倍。 （3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。 （4）壮苗培养 ①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。②培养条件。光照10～12小时/天，光强800～1800LX，温度20～23℃，最高24～26℃。 （5）生根与移栽 月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2～3厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。 （a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。 （b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1％的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。 （c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85％以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。4～6周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经4～6周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花，此时即可出售，或上盆种植，利于观赏。 （d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐渐由0.1％提高到0.3％左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS培养液等，通常每7～10天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。 三、影响月季增殖的因素 1.BA用量及侧芽在茎段上的位置对侧芽发育的影响。用“和平”品种月季的枝条，均等分为6段，取每段的一个侧芽培养在无激素的MS基本培养基上，23天后可见接近枝条最顶端和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育比较快。 在不同浓度BA的MS培养基上，BA含量为0.03～0.3毫克/升的培养基，促进“皇冠”“彩云”侧芽的发育，如果BA超过O.3mg/L，则延迟芽的发育，但对于茎段中部的芽影响较小。 2.摘心对茎增殖的影响。在继代培养的接种操作时，切去嫩芽的顶芽后，再转接到新的培养基上，对嫩芽增殖有很大的促进作用。 3.赤霉素的影响。试用了赤霉素，其浓度为0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升，试验发现所有浓度都抑制茎增殖，随着其浓度增高，茎增殖数下降，赤霉素浓度增加，还出现细长的嫩茎和发育不全的叶子，畸型植株等。 4.嫩芽长度对形成多芽苗的影响。茎尖在1～10毫米长短时，对形成多芽苗最有效，不但百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多，切割过短或过长都对茎的增殖不利，芽苗形成较少。切割过长会表现出叶子衰老等不利的现象，最适宜的茎尖长度为6～10毫米。 5.每次继代培养所需时间对嫩茎增殖的影响。在MS+BA3+IAA0.3的培养基上，“红双喜”月季的培养时间为28天，继代一次较好，超过28天，茎的数目已不再增加。 6.MS配方和无机盐浓度。试验证明，全量的MS无机盐对茎增殖效果最好。 四、影响月季生根和移栽成活率的因素 1.不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。以“彩云”为材料，用NAA、IAA两种不同浓度的生长素做生根试验，发现用NAA诱导生根和提高移栽成活率效果最好，浓度为100ppm为宜，发现以IAA诱导生根和提高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在1mg/L以下，超过时对生根的促进作用已不显著，反而大幅度降低移栽成活率。 2.无机盐浓度和含糖量对月季生根的影响。采用较低浓度的无机盐对月季生根效果较好。但糖浓度不可降低。否则削弱苗的生长势。试验证明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。 3.琼脂用量及对生根的影响。琼脂粉用量在4～5克/升的范围内对生根效果影响没有显著差别，以4克/升稍优，用最小不利于凝固，用量大培养过硬不利于扎根。 五、结论 用组织培养的方法生产月季试管苗不仅生产周期短，而且繁殖倍数高，周年均可生产，年可生产月季试管苗50万株，经济效益，社会效益都很可观，建议业界同仁能够关注此项事业。（多伦县农业技术推广中心）（记者 佚名）

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